1. Use filtros on-line
O filtro em linha é colocado entre o autosampler e a coluna cromatográfica (ou coluna de guarda). Os filtros comuns em linha são divididos em filtros in-line de aço inoxidável com frit substituível (0,5 μm ou 0,2 μm) e PEEK descartável. Para filtros on-line feitos de diferentes materiais, geralmente uma placa de peneira com uma abertura menor do que a placa frit coluna deve ser selecionada, de modo a interceptar efetivamente as partículas que podem bloquear a placa frit da coluna cromatográfica. Uma vez que se verifica que a pressão do instrumento começa a aumentar, é possível que o filtro em linha frit está começando a entupir e devemos atualizá-lo antes que ele fique completamente entupido.
Os filtros em linha funcionam como membranas, mas não requerem nenhum trabalho adicional. Após a centrifugação da amostra, ainda é possível que uma pequena quantidade de partículas entre no instrumento, e as partículas residuais possam ser interceptadas pelo filtro em linha localizado em frente à coluna cromatográfica. Além disso, a vantagem do filtro online é que ele é simples e fácil de substituir. Geralmente, leva apenas 5 minutos para substituí-lo, e pode ser reiniciado para uso, e não precisa gastar tempo reajustando ou calibrando. Outra vantagem é que o filtro em linha também pode filtrar as partículas geradas pelo desgaste do envelhecimento de algumas partes do instrumento. Eu defendo fortemente que cada instrumento de fase líquida está equipado com um filtro em linha. Mesmo que uma coluna de proteção seja usada, também recomendo instalar um filtro em linha antes da coluna de proteção.
2. Use a coluna do guarda
Uma coluna de guarda é uma breve coluna cromatográfica instalada em frente à coluna cromatográfica. Geralmente tem 1-2 cm de comprimento, e a embalagem é combinada com a embalagem da coluna usada, e o tamanho dos poros do frit usado não é maior do que o do frito usado na coluna. A coluna de proteção tem duas funções: (1) pode bloquear as partículas que podem bloquear a coluna; (2) como a coluna de guarda e a embalagem da coluna são combinadas, quaisquer impurezas químicas que possam interagir irreversivelmente com a embalagem da coluna sem picos serão capturadas primeiro pela coluna de guarda.
O uso de uma coluna de proteção pode definitivamente prolongar a vida útil da coluna. No entanto, antes de considerar se deve usar uma coluna de proteção, recomenda-se avaliar os seguintes pontos:
(1) A coluna de guarda não é barata, por isso considere se o custo de compra da coluna de guarda pode ser compensado pelo aumento da vida útil da coluna;
(2) Quanto tempo é a vida da coluna de guarda? É necessário prestar atenção quando o cartucho de guarda precisa ser substituído, para não contaminar a coluna cromatográfica porque a substituição é tarde demais;
(3) Como lavar a coluna de proteção? Ao lavar, a coluna de guarda e a coluna cromatográfica precisam ser lavadas separadamente para evitar a lavagem das impurezas acumuladas na coluna de guarda na coluna cromatográfica;
(4) Não espere aumentar a eficiência da coluna devido à adição de uma coluna de guarda de 1 a 2 cm. Embora a instalação de uma coluna de proteção seja semelhante ao aumento do comprimento da coluna, o uso de uma coluna de proteção também adiciona dois conectores e tubos de conexão, o que reduzirá a eficiência da coluna do sistema de instrumentos, por isso seria bom se a eficiência da coluna sem uma coluna de proteção pudesse ser mantida.
Desnecessário dizer que o uso de colunas de guarda certamente pode prolongar a vida útil das colunas, mas recomenda-se que cada laboratório avalie a necessidade de colunas de guarda em termos de economia e esforço. Mesmo com uma coluna de proteção, recomendo colocar um filtro em linha entre a coluna de proteção e o autosampler, afinal substituir o filtro em linha é mais barato do que substituir a coluna de proteção e aumenta a vida útil tanto da coluna de proteção quanto da coluna.
3. Não entre amostras não tratadas
Com ou sem pré-tratamento, recomenda-se que todas as amostras sejam filtradas ou centrifugadas antes da injeção. Por exemplo, quando a amostra é filtrada através de uma membrana de filtro para remover partículas e, assim, reduzir o entupimento da frit da coluna cromatográfica, o tamanho dos poros da membrana do filtro deve ser menor do que o tamanho dos poros da coluna cromatográfica. Geralmente, colunas cromatográficas com partículas maiores que 3 μm usam 2 μm frit, colunas cromatográficas com partículas de 3 μm usam 0,5 μm frit, e colunas com partículas menores que 3 μm geralmente usam 0,2 μm frit, de modo que os filtros gerais de 0,45 μm podem basicamente ser usados em todas as colunas cromatográficas, exceto para partículas sub-2 μm; para colunas com partículas sub-2 μm, filtros com poros de 0,2 μm são geralmente utilizados. A maioria das membranas de filtro são pré-embaladas e podem ser diretamente conectadas a uma seringa para filtração ou usadas como placa de filtro em uma placa de 96 poços.