Os cinco principais sistemas de um cromatógrafo líquido são os seguintes:
1. Sistema de injeção
Geralmente, um amostrador de injeção de diafragma ou sala de injeção de alta pressão é usado para completar a operação de injeção, e o volume de injeção é constante.
Isto é benéfico para melhorar a reprodutibilidade de amostras analíticas.
2. Sistema de infusão
O sistema consiste em três partes: uma bomba de alta pressão, um reservatório de fase móvel e um gradienter. A pressão geral de uma bomba de alta pressão é 1,47 ~ 4,4X107Pa e a vazão é ajustável e estável. Quando a fase móvel de alta pressão passa pela coluna de cromatografia, pode reduzir o efeito de difusão da amostra na coluna e acelerar sua velocidade de movimento na coluna. Isto é benéfico para melhorar a resolução, recuperar a amostra e manter a atividade biológica da amostra. Erros de armazenamento de fase móvel e gradienteres podem alterar a fase móvel de acordo com as propriedades da fase estacionária e da amostra, incluindo alteração da polaridade do eluente, força iônica, valor de pH ou mudança para outros métodos
3. Sistema de separação
O sistema inclui colunas de cromatografia, tubos de conexão e termostatos.
O comprimento de uma coluna cromatográfica é geralmente de 10-50cm (se duas forem necessárias em combinação, um tubo de conexão pode ser adicionado entre as duas), com um diâmetro interno de 2-5mm. É feito de aço inoxidável de alta qualidade, tubo de vidro de paredes espessas, liga de titânio e outros materiais. A coluna é equipada com diâmetro de 5-10 μ Uma fase fixa com granulometria m (composta por matriz e líquido fixo), em que a matriz é composta por resina de alta resistência mecânica ou sílica gel, sendo que ambos possuem características de inércia (como a remoção básica de genes de silicato na superfície do gel de sílica), porosidade e grande área superficial específica. Além disso, sua superfície é revestida mecanicamente (semelhante à preparação de fases estacionárias em cromatografia gasosa) ou quimicamente acoplados a vários genes (tais como grupos fosfato, amina quaternária, hidroximetilo, fenilo, amino ou alquilo de cadeias de carbono de vários comprimentos) ou ligandos.
Portanto, esses tipos de substâncias com diferentes estruturas relativas fixas apresentam boa seletividade. Por exemplo, acoplando lectina de ervilha (PSA) na superfície de sílica gel porosa, uma glicoproteína pode ser isolada de fibroblastos. Além disso, o plasmídeo da fase estacionária é pequeno e o leito da coluna é fácil de atingir um estado uniforme e denso, o que pode reduzir bastante o efeito de difusão da corrente parasita. A matriz possui tamanho de partícula pequeno e microporos rasos, e a amostra possui curta transferência de massa na área microporosa. Eles são benéficos para reduzir a largura de banda e melhorar a resolução. De acordo com a análise da teoria da eficiência da coluna, quanto menor o tamanho das partículas da matriz, maior será o número teórico N da bandeja.
4. Sistema de detecção
Existem três detectores comumente usados para cromatografia líquida: detector UV, detector de índice de refração diferencial e detector de fluorescência.
Detector UV
Este detector é adequado para detectar amostras com desempenho de absorção de luz ultravioleta (ou luz visível).
Suas características: ampla gama de aplicações (como proteínas, ácidos nucléicos, aminoácidos, nucleotídeos, peptídeos, hormônios, etc. podem ser usados); Alta sensibilidade (limite de detecção de 10-10g/mL); Ampla faixa linear; Não é sensível a mudanças de temperatura e vazão; Pode detectar amostras eluídas por solução gradiente.
5. Sistema de processamento de dados
Este sistema pode coletar, armazenar, exibir, imprimir e processar dados de teste, permitindo a separação, preparação ou identificação adequada de amostras.
Em resumo, o cromatógrafo líquido consiste em um sistema de amostra, um sistema de infusão, um sistema de separação, um sistema de detecção e um sistema de processamento de dados. A combinação desses sistemas torna o experimento mais confiável e estável.